有机磷类农药是有机我国使用广泛、用量最大的磷中杀虫剂。有机磷农药多为易挥发的毒样油状液体,多数有蒜臭味;易溶于多数有机溶剂,气相多不溶于水或微溶于水,色谱遇碱性物质易分解破坏。有机常见的磷中有机磷类农药主要是敌敌畏、对硫磷、毒样甲拌磷、气相乙拌磷、色谱内吸磷、有机乐果、磷中氧化乐果、毒样敌百虫、气相马拉硫磷、色谱甲胺磷、乙酰甲胺磷、辛硫磷、毒死蜱、杀螟硫磷、久效磷、三唑磷等。
急性有机磷农药中毒(AOPP)是指有机磷农药短时间大量进入人体后造成的以神经系统损害为主的一系列伤害,临床上主要包括急性中毒患者表现的胆碱能兴奋或危象,其后的中间综合征以及迟发性周围神经病。每年全世界有数百万人发生有机磷农药中毒事件,其中约有30万人口死亡,且大多数发生在发展中国家。
有机磷农药进入人体的主要途径有三个:①经口进入:误服或主动口服(见于轻生者);②经皮肤及黏膜进入:多见于热天喷洒农药时有机磷落到皮肤上,由于皮肤出汗及毛孔扩张,加之有机磷农药多为脂溶性,故容易通过皮肤及黏膜吸收进入体内;③经呼吸道进入:空气中的有机磷随呼吸进入体内。口服毒物后多在10min至2h内发病,经皮肤吸收发生的中毒,一般在接触有机磷农药后数小时至6d内发病。
有机磷农药进入人体后往往病情迅速发展,患者很快出现如下症状:①毒蕈碱样症状:恶心、呕吐、腹痛、多汗、流泪、流涕、流涎、尿频、大小便失禁、心跳减慢和瞳孔缩小、咳嗽、气急,严重患者出现肺水肿,导致死亡;②烟碱样症状:患者面、眼睑、舌、四肢和全身横纹肌发生肌纤维颤动,甚至全身肌肉强直性痉挛。患者常有全身紧束和压迫感,而后发生肌力减退和瘫痪。严重者可有呼吸肌麻痹,造成周围性呼吸衰竭。此外由于交感神经节受乙酰胆碱刺激,其节后交感神经纤维末梢释放儿茶酚胺使血管收缩,引起血压增高、心跳加快和心律失常;③中枢神经系统症状:头晕、头痛、疲乏、共济失调、烦躁不安、谵妄、抽搐和昏迷等症状。
临床医生通过中毒患者的临床症状和胆碱酯酶活性测定可确定为急性有机磷类农药中毒,胆碱酯酶活性测定是有机磷农药中毒的特异性标志酶;通过气相色谱一质谱测定可明确是哪个有机磷农药化合物导致患者中毒,为案件的监测工作、报告、风险评估等提供科学依据。
有机磷中毒样品测定方法有酶化学纸片法、速测卡纸片法、酶抑制率法,可用于快速筛查。气相色谱法火焰光度检测器测定,灵敏度高,通过采用不同的前处理方法可对各种样品进行测定。随着气相色谱-质谱仪器的普及,有机磷的测定可由气相色谱-质谱法测定,与气相色谱相比,气相色谱-质谱法可提供有机磷农药化合物的质谱图,结论更加可靠,可排除由于气相色谱仅用保留时间定性而出现的假阳性结果。
气相色谱-质谱法测定有机磷农药中毒样品的国家标准方法目前还没有,而测定食品中有机磷农药残留的国家标准方法有很多,可以参考使用。如GB 23200.7-2016《食品安全国家标准蜂蜜、果汁和果酒中497种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》,GB 23200.8-2016《食品安全国家标准水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定《气相色谱-质谱法》,GB 23200.9-2016《食品安全国家标准 粮谷中475种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》,GB 23200.10-2016《食品安全国家标准桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中488种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》,GB 23200.15-2016《食品安全国家标准食用菌中503种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》,GB/T 19650-2006((动物肌肉中478种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》,GB/T 23204-2008((茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》,GB/T 23207-20086河豚鱼、鳗鱼和对虾中485种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》,GB/T 23210-20086牛奶和奶粉中511种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱一质谱法》,GB/T 23376-20096茶叶中农药多残留测定气相色谱-质谱法》,GB 23200.93-2016《食品安全国家标准食品中有机磷农药残留量的测定气相色谱-质谱法》等,针对不同的样品参考相应的国家标准,在不影响测定结果的情况下,尽量不采用或少采用步骤多的样品前处理方法,要体现快速,为最大限度地检测出中毒物,样品的处理要简单、快速、一般不进行复杂的净化步骤,用气相色谱一质谱法分析测定。
案例4:2005年12月某镇一户居民家购买了2袋饼干,家中两名儿童食用后发生中毒事件:出现恶心、呕吐、腹痛、多汗、流泪、流涕、流涎、尿频、大小便失禁、心跳减慢和瞳孔缩小等症状,临床医生根据中毒患者的临床症状和胆碱酯酶活性测定确定为急性有机磷类农药中毒,对症抢救治疗后,一名3岁女童死亡,一名4岁男童存活。经现场流行病学调查得知:两名儿童只进食了购买的饼干,没有进食其他食品,初步认为是食用饼干后引起的中毒,采集剩余饼干(样品1)和另外一包未开封的饼干(样品2)送实验室检验。
仪器与耗材:气相色谱-质谱仪,配有自动进样器和电子轰击源(EI);分析天平;旋转蒸发仪;离心机;涡旋混匀器;氮吹浓缩仪;超声波清洗器。
试剂与材料:所有试剂除另有说明外,均为分析纯,试验中所用水均为二次蒸馏水。二氯甲烷(色谱纯);无水硫酸钠(分析纯):经550℃烘烤4h,储存于干燥器中,冷却后备用。
仪器条件:色谱柱,DB一5MS石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm);色谱柱升温程序,初始温度50℃,保持1min,以10℃/min升温至250℃,保持10min;进样口温度250℃;载气,高纯氦气,恒流模式,流速为1.0mL/min;进样模式,不分流进样;进样体积1μL;电子轰击源(EI),能量70eV;离子源温度230℃;全扫描采集方式50~500amu;
传输线温度280℃;溶剂延迟5min。
样品处理:分别取剩余饼干(样品1)和未开封饼干(样品2)各5g置于研钵中加无水硫酸钠研磨至粉碎无结块,分别倒入250mL磨口瓶中,各加20mL二氯甲烷超声提取10min,过滤,氮吹至0.5mL,待气相色谱-质谱分析。
参考资料:气相色谱-质谱在仪器安全监测中的应用,版权归原作者所有,如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系。
相关链接:有机磷类农药,气相色谱法,胆碱酯酶,色谱柱
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